从有性生殖角度来看， 植物的生物学特性与传粉条件相适应； 而有效的传粉是以鲜花粉的活力、 可靠的传播媒介和可授期的花朵柱头为前提的［1］。 花粉持续活力的时间与柱头可授期共同对植物的传粉受精和植株发育起重要作用， 特别在异花授粉和远缘杂交方面的影响程度更高［2］， 了解花粉培养、 储藏及活力测定的方法是提高植物杂交育种效率的前提条件［3］。 黄薇Heimia myrtifolia为千屈菜科Lythraceae 黄薇属Heimia灌木， 原产南美洲和非洲的热带、 亚热带地区， 人类的迁移致使南亚、 东亚地区有零星分布， 在中国上海、 广西、 浙江等地均有引种， 用于园林观赏及河道美化等方面。 对黄薇的研究主要集中在生物应用方面［4-5］， 目前未见黄薇在杂交育种方面的报道。 本研究采用花粉离体萌发法研究不同温度、蔗糖质量浓度和硼酸（H3BO4）质量浓度对黄薇花粉萌发及花粉管生长的影响； 用联苯胺-过氧化氢法测定柱头可授性， 研究不同质量浓度萘乙酸（NAA）、 赤霉素（GA3）、 6-苄基腺嘌呤（6-BA）对黄薇柱头可授性的影响， 并对黄薇花粉与柱头进行电镜扫描观察， 为黄薇杂交育种亲本选配提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

黄薇花单生叶腋， 花瓣5～6， 倒广卵形， 长3～4 mm， 金黄色； 花萼钟形， 裂片间有角状附属物；花、 果期7 月［6］。 于2014 年8 月由杭州植物园引进， 经过扦插繁殖成批量小苗种植于浙江农林大学东湖校区平山植物苗圃。 植株生长良好， 可正常开花结实。 试验分别在2015 年7 月10-25 日， 2016 年7月12 日至8 月25 日进行。

1.2 方法

1.2.1 花粉采集 在7：00-8：00 采集黄薇未散粉的花药置于干燥箱内干燥2 h， 常温下自然散粉后过80目分子筛收集花粉。

1.2.2 花粉萌发培养基配制及培养 采用琼脂培养基萌发法检测花粉萌发率， 培养基于121 ℃高温灭菌20 min， 冷却至常温后备用。 硼酸（H3BO4）处理： 以100.0 g·L-1蔗糖， 8.0 g·L-1琼脂为基本培养基， 分别添加0、 0.5、 1.0、 1.5、 2.0、 2.5 g·L-1的硼酸， 在30 ℃下进行培养； 蔗糖处理： 以1.0 g·L-1的硼酸，8.0 g·L-1琼脂为基本培养基， 分别添加0、 50.0、 100.0、 150.0、 200.0、 250.0 g·L-1的蔗糖， 30 ℃下培养； 温度处理： 培养基为150.0 g·L-1蔗糖+ 20.0 mg·L-1H3BO4+ 20.0 mg·L-1CaCl2+ 100.0 g·L-1PEG 4000， 设置10、 15、 20、 25、 30、 35、 40 ℃共7 个温度梯度， 3 种处理均将培养基滴加在凹形载玻片上， 采集的花粉用毛笔均匀撒在培养基上， 放置于铺有湿润滤纸的培养皿中， 盖上保鲜膜， 置于光照培养箱内， 光照强度2 000 lx， 培养6 h。

1.2.3 柱头采集及处理 柱头采集和处理参考KHO 等［7］的方法， 提前选取即将开放、 松蕾情况相同、长势良好的花朵， 标记挂牌， 次日清晨6：00 摘取黄薇鲜花， 用镊子去除花瓣和雄蕊， 取出柱头， 分别装入含6-BA、 GA3、 NAA 等3 种植物生长调节剂溶液的5 mL 离心管中。 6-BA 的质量浓度设为1.0、5.0、 10.0、 15.0、 20.0 mg·L-1； GA3的质量浓度设为100.0、 200.0、 400.0、 600.0 mg·L-1， NAA 的质量浓度设为1.0、 5.0、 10.0、 15.0、 20.0 mg·L-1， 以蒸馏水浸泡为参照， 4 ℃保存12 h 后， 柱头在4.0 mol·L-1氢氧化钠（NaOH）溶液中常温处理6 h， 经蒸馏水洗净后用质量浓度为0.1%水溶性苯胺蓝染色1 h。 摘取开花1、 2、 4、 6、 8、 12、 24 h 的黄薇花朵， 用镊子取出柱头， 用福尔马林-乙醇-醋酸混合固定液（FAA）固定24 h， 其余染色步骤如上。

1.2.4 花粉萌发和柱头可授性检测 花粉萌发后在ZEISS Imager A2 荧光显微镜下观察花粉萌发状况，观察不同视角花粉个数大于50， 重复5 次， 拍照并记录， 花粉萌发率=（萌发花粉/花粉总数）×100%。 用联苯胺-过氧化氢法测定柱头可授性［8］。 将处理后的柱头放入4.0 mol·L-1NaOH 溶液中常温处理6 h， 浸入盛有联苯胺-过氧化氢反应液（1%联苯胺∶3%过氧化氢∶水为4∶11∶22， 体积比）染色1 h， 随后取出并移置载玻片上， 滴加体积分数为50%中性甘油， 盖片压片， 用ZEISS Imager A2 荧光显微镜进行观察［9］；反应液呈蓝色并伴有少量的气泡， 表明柱头具有可授性； 反应液无变化， 则柱头无可授性［10］。 每处理重复5 次， 并拍照。

1.2.5 花粉和柱头的扫描电镜观察 黄薇花粉和柱头经过硅胶干燥， 雌蕊经FAA 固定24 h 以上， 乙醇溶液梯度脱水。 临界点干燥后， 固定于样品台上， 离子溅射仪镀金， 在S-3700N Hitachi 扫描电镜下观察拍照。 选取5 个花粉或柱头， 重复3 次。 利用Image-Pro plus 6.0， Photoshop CS6， SPSS 19.0 分析处理图像及数据。

文章来源：《园艺学报》 网址: http://www.yyxbzz.cn/qikandaodu/2020/0911/345.html

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